超分辨率显微镜

DNA绘制成像

单分子定位显微镜在纳米级地形中的点积累

探索DNA漆溶液

唯一用于多重,多色DNA-Paint成像的开箱即用的解决方案

结合布鲁克的软件控制,自动化bob电竞安全吗,完全集成微流体单元, 这Vutara VXL超分辨率显微镜为唯一的商业系统它提供了开箱即用的多路复用DNA-Paint功能。在这些工具上执行的DNA-Paint成像允许在单分子定位显微镜中进行低于10 nm的定位精度具有无限的多路复用电位

此外,带有微流体系统的Vutara显微镜提供了:

  • 无需专家服务和支持,以加快时间收集数据
  • 与使用翻新系统收集的数据更可靠和重复的结果
  • 自动化和多条件/多用户编程,用于易于扩展实验设计

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什么是DNA粉末?

什么是DNA粉末?

DNA-Paint是一种通过与荧光团标记的短(<10个核苷酸)寡核苷酸结合到与靶分子结合的互补寡核苷酸,通常是抗体,通常是抗体。它允许广泛的成像方式,从全细胞广泛的Z堆栈到高分辨率的多目标图像。

了解DNA绘制成像的优势

短寡核能的结合本质上是短暂的,因此产生了类似于Dstorm或Palm的闪烁效果,但是DNA-Paint比其他闪烁技术具有许多优势。将DNA涂成像用于核酸纳米结构的优点包括:
  • 较高的光子产量:眨眼通常比常规DSTORM更长。与DSTROM和PALM等方法相比,这会导致较高的光子产生的荧光团产量,因此可以具有更高的定位精度(<10 nm)。
  • 实际上不可漂白的成像:样品沐浴在过量的荧光团中,可以进行极持续的成像。
  • 无限的多路复用潜力:由于目标特异性是由核苷酸序列设置的,因此有可能(使用正确的工具)标记具有不同寡核序列的多个目标。使用Vutara的集成微流体单元,可以从样品中洗涤给定靶的成像链,并可以添加不同的成像链标记不同的生物学靶标。

DNA-Paint如何工作?

DNA-Paint如何工作?

DNA-PAINT通过短暂的“成像寡核苷酸”的瞬时结合,该结合含有荧光团到互补的寡核苷酸(称为“停靠链”)的目标,例如感兴趣的目标,例如抗体,纳米体,Aptamer,Aptamer或suicide酶体。

使用与DNA-Paint的超分辨率显微镜

使用DNA斑点进行超分辨率成像涉及多个步骤,包括:

  1. 样品通过常规技术用“对接链”标记,并准备成像。
  2. 为了进行成像,样品以成像缓冲液(通常为PBS,但可能包括氧气清除剂)和低(通常为0.1-1 nm)的成像成像寡核的浓度(通常为0.1-1 nm)浸入成像缓冲液中。成像寡核体的长度通常为9-10个核苷酸,并包含荧光团。由于其荧光性和较低的背景,我们建议使用CY3B用于DNA斑点。
  3. 进入成像缓冲液后,可以成像样品。成像链与对接链的瞬态结合阻止了荧光团的扩散,从而使其在相机上成像。

由于样品被沐浴在大量不断交换成像链中,因此目标本质上是不可漂白的,因此可以将大量框架和扩展的Z堆栈进行分解。

上面的卡通显示了DNA斑点的工作原理。靶蛋白(微管蛋白)用带有对接链寡核的抗体标记。然后将样品沐浴在成像链寡醇中。荧光标记的成像链与对接链的瞬态结合导致样品看起来眨眼,然后可以将其定位在Vutara SRX软件中。重复此过程,直到形成超分辨率图像为止。

为什么要使用DNA-Paint?

为什么要将DNA-Paint用于3D细胞超分辨率成像?

BS-C-1细胞中微管蛋白网络的3D细胞骨架成像。细胞用α-微管蛋白原代抗体和抗兔寡聚的二抗标记。左:3D微管蛋白网络深度为颜色。右:小管蛋白聚合物的特写视图,显示了空心标记腔。次级DNA粉末抗体购自大量 - photonics.com

高精度本地化

DNA-Paint允许亚10 nm的定位精度,使其成为可用的最精确的显微镜技术之一。

在这里,将带有水浸入水1.2 Na物镜的Vutara显微镜用于DNA-Paint实验。该图像显示了整个BS-C-C-1细胞的小管蛋白网络,该网络用与DNA-Paint二抗结合的微管蛋白抗体标记。插图显示了微管蛋白网络的放大部分。微管的管腔清晰可见。

多色不可漂白的成像

通过DNA-Paint使多重多色超分辨率成像成为可能。

DNA-Paint具有大规模多色Z堆栈的潜力,因为该样品实际上是无限的荧光团供应。这使大规模的Z-stack成像由数百万个本地化组成。

在这里,在Vutara单分子定位显微镜上进行了两色DNA-Paint实验。微管蛋白在洋红色的青色和甲壳蛋白上标记。此外,由于DNA-Paint大型Z堆栈的不可漂白,因此是可能的。

BS-C-1细胞中微管蛋白网络和网状蛋白笼的3D细胞骨架成像。细胞用α-微管蛋白和抗拉取重链原代抗体和抗兔和抗小鼠寡核苷的二抗二抗标记。顶部:用α-微管蛋白(青色)和网状蛋白笼(Magenta)标记的BS-C-1细胞。底部:与上述图像相同的电影的电影,显示了数据的3D性质。次级DNA粉末抗体购自大量 - photonics.com
左:DNA-Paint的工作流程。每个靶标(肌动蛋白,TOM20,微管蛋白和网状蛋白)都标记为初级和二抗。次级抗体具有正交对接链。每个目标通过在互补成像的寡核中流动到所需的目标,然后进行依次成像,然后在下一个成像链中流动以进行下一个目标,然后进行洗涤步骤。使用Vutara显微镜和SRX软件自动处理流体和成像。右:每个目标的图像会自动组合在SRX软件中。次级DNA粉末抗体购自大量 - photonics.com

无限的多路复用潜力

DNA-Paint具有多重成像的巨大潜力。

在这里,使用VUTARA VXL和集成的流体单元进行了多目标DNA-Paint实验。在不同的探针上使用正交对接链,可能有可能无限的目标数量。

还图所示是在Vutara单分子定位显微镜和集成的流体单元上进行的四个目标DNA漆实验。F-Actin-Magenta,Tom20-Cyan,微管蛋白 - 黄色和网状蛋白绿色。

示例图像

图像自动收集了使用流体的Vutara VXL

示例图像:用于改进的超分辨率成像的DNA绘制图像

BS-C-1用抗微管蛋白,肌动蛋白,抗TOM20和抗克拉蛋白标记。购买正交2ºDNA涂料是从中购买的巨大的 - photonics.com

左上:肌动蛋白 - 马根塔,微管蛋白黄色,线粒体 - 橙色。


右上:线粒体 - cyan,F-肌动蛋白 - 麦加特塔,微管蛋白黄色,网状蛋白重链绿色。
左下:f-肌动蛋白 - 克拉辛笼绿色。
右下角:线粒体 - 小管,微管蛋白 - 马根塔。